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杯状病毒猫及其细胞传代的分离与鉴定

发布日期:2019-05-15 22:32 浏览次数:80

杯状病毒猫及其细胞传代的分离与鉴定
应该做的
[摘要]猫杯状病毒(FCV)是杯状病毒家族的成员,是导致猫科动物疾病的重要病原体。
当猫感染FCV时,会出现发烧,口腔溃疡和鼻结膜炎等临床症状。当病情严重时,就会导致死亡。
猫的杯状病毒在世界上许多国家广泛流行。
中国已经从猫,老虎和猎豹等各种动物身上分离出FCV。
杯状病毒猫的不同菌株具有更大程度的变异性和抗原性,并且现有疫苗不能提供完全保护。
目前,杯状病毒疫苗主要是减毒和灭活疫苗。随着燃料电池汽车的普遍流行,新的库存品种不断涌现。
因此,FCV研究对其预防和管理非常重要。
在这项研究中,我们治疗,分离和培养了一种猫鼻咽拭子的鼻结膜炎,被认为是吉林猫感染的F81细胞,分子生物学,形态学,免疫学和其他鉴定系统存储在猫杯状病毒的系统发育实验室中的豹衍生物连续传递给F81细胞20代。
在细胞的每个步骤之前确定一半的病毒感染(TCID 50),然后测定为零。
将一个MOI感染接种到F81细胞中,记录损伤时间,并绘制病毒生长曲线。通过RT-PCR扩增每代FCV(P1,P5,P10,P15,P20)的ORF2基因片段,并使用DNASSTA,MEGA和其他软件将测序结果与FCV参考序列进行比较。分析Genbank中包含的氨基酸突变位点并绘制遗传进化树。申请NetNGlyc1。
0,银阳1。
诸如ProtScale的在线软件预测由ORF2基因编码的蛋白质的糖基化位点和疏水性。
结果表明,用F81细胞接种猫鼻咽拭子后出现典型的葡萄病变。经过分子生物学,形态学和免疫学鉴定,证实分离的菌株为猫?杯状病毒,称为CH?JL1,CH?JL2菌株,CH?JL3菌株和CH?JL4菌株。这是。细胞通过后,5 FCV滴度逐渐稳定,最终达到109。
0 TCID 50 / mL或更高。生长曲线的测量结果显示FCV菌株在细胞中的复制特征是不同的。菌株CH 2 JL3和菌株CH 2 SH在16小时内达到最高的病毒滴度,菌株CH 2 JL2和菌株CH在~20小时内达到最高。CH?JL1菌株后24小时。ORF2基因的比对分析表明,FCV细胞传代后氨基酸突变位点含有菌株CH-JL1.S440L的P57S和菌株G494R的K514D和菌株CH-JL4的CH-JL3,K614I。。对CHβSH菌株的K448R和基因进化的分析表明,CH?JL2和CH?JL3菌株处于同一进化分支中,具有95个同源性。
9%CH?JL1菌株和国内FB?NJ?13菌株,CH?SH菌株和国内GD菌株处于进化分支,CH?JL4菌株和额外F65菌株具有密切的遗传关系。
对ORF2基因编码的蛋白质的糖基化位点的分析和疏水性的预测显示,5种FCV的疏水性相似,并且存在多个O-糖基化位点。
在本研究中,从猫鼻咽拭子中成功分离出猫杯状病毒,通过连续传代细胞获得了具有高滴度和稳定性的猫科病毒株。FCV疫苗株的进一步开发。
[学位授予单位]:吉林农业大学[年级]:硕士课程[学期]:2016年[分类号]:S852。
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